实验大比拼丨超色差校准物镜在脑组织四色免疫荧光分析中的应用

简介

使用荧光染料标记生物组分，然后利用光学显微镜获取荧光图像的方法，已成为观察生物组织和细胞分子定位的常用实验方法。 然而，由于显微物镜中透镜组造成的光学色差，常会导致难以使用紫外光和近红外区域中的荧光染料，在同一标本中精确显示不同组分在细胞内的准确的共定位关系。使用EVIDENT超色差校准物镜PLAPON60XOSC，即使荧光标记横跨紫外和近红外区域，也能以几乎没有色差的方式准确显示荧光标记分子定位情况。下面介绍在单个标本中使用四种类型荧光抗体，仍然可以准确可视化荧光标记分子的共定位分析的案例。

超色差校准物镜的应用-脑组织的四色免疫荧光

脑组织的四色免疫荧光：图（1）

VIAAT染色（Alexa Fluor405，蓝色）

CB1染色（Alexa Fluor488，绿色）

VGluT3染色（Cy3，红色）

合成酶DGLα（白色）和受体CB1（绿色）聚集在小鼠基底杏仁核的锥体细胞胞体（星号）周围，形成具有独特内陷结构的内陷突触（箭头）。这些侵入性突触表达囊泡抑制性氨基酸转运蛋白（VIAAT）（蓝色）和囊泡谷氨酸转运蛋白-3（VGluT3）（红色），表明其分别具有抑制性和兴奋性递质GABA和谷氨酰胺酸的神经化学特性。与此相比，如果未在其周围形成DGLα簇，则抑制性突触的CB1阳性、VIAAT阳性常见类型不表达VGluT3，这表明其仅具有GABA的神经化学特性。比例尺：5 μm。

脑组织的四色免疫荧光：图（2）

VIAAT染色（Alexa Fluor405，蓝色）

CB1染色（Alexa Fluor488，绿色）

VIP染色（Cy3，红色）

GABAergic篮状细胞有两种表达受体CB1并控制锥体细胞胞体的亚型，一种亚型表达胆囊收缩素（CCK），另一种表达血管活性肠肽（VIP）。这种四色免疫荧光染色显示，在高表达CB1（绿色）和VIAAT（蓝色）的阳性神经末梢（红色）周围缺乏DGLα（白色），这表明VIP阳性神经末梢不参与侵入性突触的形成。比例尺：5 μm。

适于这类应用的产品

FV3000

• 配有常规扫描单元的FV3000或配有常规/共振混合扫描单元的FV3000RS

• 可在所有通道进行高效、准确的全真光谱检测

• 可针对活细胞进行优化的高灵敏度和低光毒性成像

• 可根据各种应用和样品类型灵活选择倒置和正置机身

PLAPON-SC 超色彩校准物镜

这种超色差校准物镜可校正大范围的色差，采集的图像可以准确反应荧光信号定位。它可大幅度校正2D和3D图像中的横向和轴向色差，从而为共定位分析带来可靠性和准确度。

• 大限度补偿色差

• 每一个物镜都附带实测色差数据，405 nm到650 nm之间的轴向色差小于0.1 μm

• 适合严格共定位分析或超分辨率成像
  
  结论：

  如图（1）和（2）所示，针对多种功能分子和细胞标志物的四色免疫荧光提供有关细胞表达和亚细胞定位的详细信息，其中包括相关功能细胞与细胞间空间距离的相互依赖或独立关系。更为重要的是，显微镜的检测灵敏度和分辨率，以及能够尽可能减小色差的物镜光学性能是实现免疫荧光目标的重要因素。

  图像数据由以下人士提供：Masahiko Watanabe（医学博士），北海道大学医学研究生院解剖学系。 参考文献：神经科学杂志2015年3月11日； 35（10）：4215-28。

  doi：10.1523/JNEUROSCI.4681-14.2015。